由江苏昆山检验检疫局和南京农业大学共同申请的“雪松疫霉根腐病菌快速分子检测技术研究”课题日前通过专家鉴定。该研究以tRNA序列为靶点，首次应用于卵菌的鉴定，并建立了一套快速、灵敏、高效的基于PCR检测雪松疫霉根腐病菌的方法，该研究对从GenBank中得到P.lateralis和其他疫霉种的tRNA序列进行分析，设计了一对特异性引物T1/T2，利用该引物对其他15种疫霉和其他真菌进行特异性扩增，发现只能从P.lateralis中扩增得到一条192bp的条带，其他菌株均无扩增条带出现，表明该对引物具有种的特异性。
在25μL反应体系中，普通的PCR方法能检测到10pg P. lateralis基因组DNA，而该研究的体系中采用套式PCR技术将检测P.lateralis基因组DNA的灵敏度提高到了1fg，效率提高了1万倍，这对于靶标病原物的量非常低或存在PCR抑制物时非常重要。这表明该研究设计的引物具有很高的灵敏度。对发病植株进行检测时，结合简单的DNA提取方法使用特异引物T1/T2进行PCR扩增，一个工作日就可以判断植物是否被P.lateralis侵染。使用NaOH裂解法可以在30分钟之内即可得到病组织中病原菌的DNA用于PCR扩增，而使用传统的方法检测至少需要两周，检测时间大大缩短。
该研究建立的雪松疫霉根腐病菌检测方法具有准确、快速、简单易操作等优点，可以在病害侵染初期鉴定出病原物，可参考应用于出入境植物和植物产品的检验检疫及田间调查，对控制雪松疫霉根腐病菌传入我国具有重要意义。同时，该方法的建立也为其他病原菌的检测提供了技术指导和理论依据。
（纪 睿）
《中国国门时报》
